铜绿假单胞菌lasr基因反义核酸原核表达载体的构建及对该菌毒力的影响

pcr扩增lasr基因，用反向克隆法构建lasr基因反义核酸原核表达载体pucp18/lasrantisense并转化铜绿假单胞菌，经酶切、pcr及测序鉴定重组载体.rt-pcr检测lasb基因和lasi基因mrna的表达，nad法测定外毒素a的活性，紫外分光光度计测定绿脓菌素的产生水平.用转化pucp18/lasrantisense质粒菌株感染大鼠呼吸道并进行病理组织切片检查.pcr扩增出约720bp片段，与genbank(no：nc_002516)报道的基因片段大小一致，构建了lasr基因反义核酸原核表达载体pucp18/lasrantisense，并成功转化铜绿假单胞菌,且有效表达,使转化菌的毒力因子弹性蛋白酶、外毒素a和绿脓菌素表达水平均降低.与标准株感染的大鼠比较，转化pucp18/lasrantisense质粒菌株感染的大鼠支气管炎症明显减轻.上述结果表明，lasr基因反义核酸原核表达载体pucp18/lasrantisense可以降低铜绿假单胞菌的毒力.