快捷的定点突变效率近100%的大引物pcr方法

报道了一种新的pcr突变方法，它不需要纯化大引物或设计特别的旁侧引物．利用一个诱变引物和两个测序引物(tm≤58℃)作为旁侧引物．第一轮pcr产物12.5μl直接加入到50μl的第二轮pcr反应体系作为模板和大引物，在开始第二轮pcr反应时，增加在68℃退火温度下进行10个循环的不对称pcr，这一步骤大大提高了通过600bp或800bp大引物所导致的突变效率．结果表明，该方法的产物能够达到高保真、97%～98%的突变效率和高产率．