大鼠脑cdna文库的构建

采用简单高效的cdna合成技术制备wistar大鼠脑cdna基因文库，以纯化的poly(a)+－rna为模板，含noti切点的oligo－（dt）15为引物，在反转录酶的作用下，合成第一股单链cdna；用e.colirnaseh除去模板rna，并以e.colidna聚合酶ｉ，e.colidna连接酶和t4dna聚合酶催化合成cdna第二条链，即成为双链cdna；此双股cdna除0．5μg用于插入psporti载体，转入e.colidh5a，建成cdna文库外，其余保存在－20℃，以此cdna为模板，应用pcr方法，先后克隆了谷氨酸脱羧酶（gad，1800bp）、神经元特异性烯醇化酶（nse，1340bp），甲状腺激素受体（t3－receptor，1230bp）、胆囊收缩素（cck，345bp）的全编码基因．