一种新颖简便的荧光实时rt-pcr相对定量方法的建立

为建立一种新颖、简便的荧光实时rt-pcr相对定量方法，根据实时定量标准曲线，推导出相对定量基因表达的公式.公式显示相对表达指数只与ct值和标准曲线的斜率相关.构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得，实验过程繁琐.当人为成比例增减标准品各个稀释度的具体拷贝数时，标准曲线的斜率并不改变，说明标准曲线斜率与标准品的具体拷贝数无关.因此，新的相对定量方法可以用任何一个待测样品的总rna(或cdna)，经系列稀释后作为标准品，来构建相对定量标准曲线，获得斜率.与绝对定量法比较，新方法获得了基本相同的斜率和非常一致的定量结果(差异小于4%)，而传统的2-δδct法却表现出较大的定量误差.这些结果表明，新的相对定量方法是一种简便、准确和高效的定量基因表达的方法.