鼻咽癌侯选抑瘤基因brd7原核表达载体的构建及其表达(英)

brd7基因是一个鼻咽癌侯选抑瘤基因，为了构建brd7基因的原核表达载体并使其在大肠杆菌得到表达，设计了带有salⅰ，notⅰ酶切位点的引物，以已构建好的质粒pgem-teasy/brd7为模板，用pcr扩增出brd7基因的完整阅读框架，并用salⅰ，notⅰ酶切pcr产物和原核表达载体pgex-4t-2，然后用t4dna连接酶将其连接，得到重组表达质粒pgex-4t-2/brd7，经双酶切鉴定和测序验证，表达载体构建正确.重组表达质粒转化感受态大肠杆菌jm105后用iptg诱导，成功表达了一分子质量约为90ku的融合蛋白;37℃诱导4h后，sds-聚丙烯酰胺凝胶(page)电泳后，经扫描分析该融合蛋白产量占菌体蛋白总量28.48%,蛋白质印迹(western-blot)证实了该融合蛋白的表达获得成功.这为brd7基因的蛋白纯化及抗体制备，进一步开展其功能研究奠定了基础.