采用蛋白质工程技术将αb-晶状体蛋白导入心肌细胞的初步研究

为将αb-晶状体蛋白（αb-crystallin,αb-c）导入心肌细胞，采用蛋白质工程技术将人αb-晶状体蛋白全长cdna基因克隆至具有细胞膜通透能力的膜移位序列（membrane-translocatingsequence,mts）的碱基顺序的下游，在大肠杆菌中表达谷胱甘肽5-转移酶(gst)-mts-αb-c融合蛋白.用谷胱甘肽-sepharose4b亲和层析分离表达产物,用xa因子将其中gst切除，并通过阴离子交换层析纯化mts-αb-c.纯化的mts-αb-c在sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳(page)上呈单一条带，分子质量23ku;免疫印迹显示gst-mts-αb-c与mts-αb-c均能为人αb-c抗体识别而在相应位置出现清晰条带.gst-mts-αb-c与mts-αb-c均有分子伴侣活性.用异硫氰荧光素（fitc）标记的mts-αb-c与心肌细胞共培养后，在荧光显微镜下观察到其进入了心肌细胞.