伪狂犬病病毒闽a株ge基因去信号肽片段在pichiapastoris中的表达

伪狂犬病病毒囊膜糖蛋白e是一种在伪狂犬病根除计划中具有重要作用的糖蛋白.将伪狂犬病病毒闽a株ge基因去信号肽片段克隆到巴斯德毕赤酵母（pichiapastoris）表达载体ppiczαa中，获得的重组表达载体ppiczαa-fl电击转化野生型酵母菌smd1168后，得到多株酵母工程菌smd1168/ppiczαa-fl.经高浓度zeocintm筛选、表型鉴定、工程菌的诱导表达及表达产物的鉴定，最后得到高效表达ge基因去信号肽片段的酵母工程菌smd1168/ppiczαa-fl-7.工程菌72h培养上清的sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳与蛋白质印迹结果显示，ge基因去信号肽片段表达产物大小约为80ku，比预期的63.8ku大.凝胶薄层扫描结合bradford蛋白质总含量测定结果表明，表达产物占工程菌培养上清总蛋白的13.49%，表达量可达11.7mg/l.间接elisa结果表明重组表达产物具有良好的抗原性，能够有效地区分伪狂犬病病毒ge标准阳性与阴性血清.