大肠杆菌碱性磷酸酶的体外定向进化研究

大肠杆菌碱性磷酸酶（e.colialkalinephosphatase,eap,ec3.1.3.1）是一个非特异性二聚体磷酸单酯酶.采用易错聚合酶链反应(errorpronepcr)的方法，在原有高活力突变株的基础上，对eap远离活性中心催化三联体的区域进行定向进化，经两轮errorpronepcr，获得催化活力较亲本d101s突变株提高3倍、较野生型酶提高35倍的进化酶4-186，并对该酶的催化动力学特征进行了分析.进化酶基因的dna测序表明4-186含两个有义氨基酸置换：k167r和s374c，二者既不位于底物结合位点，也不位于酶的金属离子结合位点.