人sdct2蛋白亚细胞定位信号分析

为了确定人高亲和力钠离子依赖性二羧酸共转运蛋白（high-affinitysodium-dependentdicarboxylateco-transporter,sdct2，nadc3）在细胞内的定位，构建了sdct2与增强型绿色荧光蛋白（egfp）的融合蛋白表达载体，并转染肾小管上皮细胞llc-pk1，激光共聚焦显微镜观察显示，sdct2蛋白主要定位于细胞的基底侧膜上.同时将sdct2-egfp融合基因mrna显微注射到爪蟾卵母细胞中表达，可见融合蛋白的绿色荧光仅分布在细胞膜上.为了进一步确定该蛋白质的亚细胞定位信号序列，将sdct2基因的n端及c端分别缺失，并构建缺失突变体与egfp的融合蛋白表达载体，将它们转染到llc-pk1中,观察sdct2缺失体在细胞内的分布情况.结果显示，n端缺失的sdct2蛋白主要位于细胞质中，顶膜和基底侧膜上也有表达；c端缺失的sdct2蛋白主要位于基底侧膜上，顶膜几乎没有表达，细胞质中表达很少.免疫组化结果也显示，sdct2只表达于人近端肾小管上皮细胞的基底侧膜.这表明sdct2蛋白的n端序列对其亚细胞定位是必需的，人sdct2蛋白的基底膜定位信号位于n端序列中.