草鱼呼肠孤病毒taqmanreal-timepcr检测方法的建立

利用rt-pcr技术扩增出草鱼呼肠孤病毒(gcrv)vp6蛋白编码区长度为1250bp的片段,克隆到pegfp-n1载体上,构建重组质粒pegfp-n1-vp6。经pcr鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pegfp-n1-vp6重组质粒,作为标准模板进行taqmanreal-timepcr扩增,制作标准曲线,建立了草鱼呼肠孤病毒的荧光定量pcr检测方法。检测结果显示,标准曲线的相关系数(r2)达到0.99809,斜率为-3.373;对初始模板定量检测的范围为1×101～1×106copies/μl;特异性试验结果表明,该方法可特异性地检测出草鱼呼肠孤病毒,而对鲤春病毒血症病毒(svcv)、传染性造血器官坏死症病毒(ihnv)无检测信号。本研究建立的草鱼呼肠孤病毒taqmanreal-timepcr方法灵敏度高、特异性强,可进行定量分析,对草鱼出血病快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。