白斑综合征病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立

根据对虾白斑综合征病毒（wssv）囊膜蛋白vp28基因保守序列，利用primerexplorerv4.0软件设计了4条引物，建立了白斑综合征病毒环介导等温扩增快速检测方法，对反应温度和反应时间等参数进行了优化，同时将建立的lamp检测方法与巢式pcr进行了比较分析。结果表明，lamp最适反应在64℃恒温条件60min内完成，凝胶电泳呈现梯型条带；反应体系中添加sybrgreeni荧光染料后，绿色的阳性结果明显区别于橙色阴性结果。lamp方法的最低检出限为100拷贝/μl，灵敏度较巢式pcr高100倍，而且lamp方法在1h内即可完成检测，操作简单，无需复杂仪器，肉眼可直接观察检测结果。用建立的lamp方法对临床发病南美白对虾样品进行了检测，结果表明，lamp方法适合对虾白斑综合征病毒的现场快速检测。