半滑舌鳎生长因子midkine的定点改造及原核表达

为进一步的研究半滑舌鳎（cynoglossusemilaevis）mk成熟肽活性与功能，对半滑舌鳎生长因子midkine成熟肽进行定点改造及原核表达。根据大肠杆菌偏爱密码子的特点，实验利用soeingpcr法对半滑舌鳎mk成熟肽进行定点突变。将改造后的半滑舌鳎成熟肽mk克隆到载体质粒pet32a()，构建原核表达载体pet32a()-mk，并转化大肠杆菌bl21(de3)plyss菌株中。sds-page结果显示，与对照组相比，经iptg诱导表达后半滑舌鳎重组蛋白mk存在于大肠杆菌上清中，产物相对分子质量约为33kd。研究表明，本实验对半滑舌鳎生长因子midkine成功进行了定点改造，原核表达质粒成功构建并在大肠杆菌中高效表达，且主要以可溶形式存在。