利玛原甲藻中聚酮合酶基因克隆与分析

为探讨聚酮合酶(polyketidesynthase,pks)基因与藻毒素合成的关系，揭示pks基因在赤潮毒素合成中的作用，采用兼并引物，通过pcr技术获得利玛原甲藻（prorocentrumlima）可能存在的i型pks基因；并对所获得pks基因的同源性进行了分析，构建了基于pks氨基酸序列的系统进化树；采用rt-pcr技术分析了pks基因在利玛原甲藻中的表达状况；并通过多聚腺苷酸rna的扩增、细菌的分离鉴定、限制性内切酶酶切、southernblotting等技术对pks基因进行了分析。结果表明，利玛原甲藻中pks基因与海洋原甲藻聚为一支，在利玛原甲藻中有显著表达；以oligo(t)引物进行rt-pcr扩增时，可出现18srrna和pks基因相应条带；限制性内切酶酶切和southernblotting结果显示，该基因中存在明显的甲基化；16srrna基因序列分析显示，从利玛原甲藻培养液中分离到的细菌与海洋放线菌假诺卡氏菌属（pseudonocardia）基因序列同源性达到99%，该菌株中并不存在pks基因。结果显示,所获得的pks基因是利玛原甲藻聚酮合酶基因，基因序列已提交genbank(ef521601)；pks可能在腹泻性贝毒合成中起着关键作用。