从毕赤酵母中提取外源重组蛋白的超声破碎条件及优化

？建立适用于从毕赤酵母菌中提取外源重组蛋白的超声破碎方法。采用westernblotting免疫印记技术检测从毕赤酵母菌中提取的外源人脂联素蛋白活性，并以外源人脂联素蛋白活性作为考察指标，采用单因素和l9(33)正交试验设计，对超声破碎条件进行优化。结果表明：在外源人脂联素蛋白活性最高的情况下，超声破碎条件为超声破碎功率450w、时间25min、时间间隔(工作时间:间歇时间)10:10(s/s)，此时细胞破碎率为(67.8±2.1)%。若在超声破碎时添加1mmol/lpmsf，虽对细胞破碎率并无显著影响，但外源人脂联素蛋白活性将会明显增高。