TaqMan探针双重荧光PCR法检测副溶血性弧菌

目的：建立同时检测副溶血性弧菌(VP)和其毒力基因的方法。方法：根据VP的toxR基因和tdh基因，分别设计引物和探针，建立基于TaqMan探针双重荧光聚合酶链式反应扩增体系，进行特异性、敏感性实验，并用建立的方法检测从广东地区和辽宁地区进出口食品中分离的VP菌株的毒力基因分布情况。结果：VP标准菌株和3株从食物中毒病人中分离株均出现toxR基因和tdh基因扩增曲线，而31株包括溶藻弧菌、单增李斯特菌等弧菌属和肠杆菌科的菌株扩增结果呈阴性；敏感性实验结果表明，VP浓度与Ct值有很好的反向的线性关系，toxR和tdh线性方程的R2分别为0.999、0.997，最低检测浓度达到3.6×102CFU/mL ；检测食品中分离的37株VP只出现toxR基因扩增曲线，未见tdh基因扩增曲线，表明37株VP分离株均未带tdh毒力基因。结论：建立的方法特异性好、灵敏度高，可用于食品中VP的特异性及毒力基因检测