thermococcussiculihj21α-淀粉酶186asp定点突变对酶活性的影响

？为确定超嗜热古菌thermococcussiculihj21α-淀粉酶(tsa)中特定氨基酸及所在位点与酶活性间的关系，以含tsa基因的pet-28a-his6质粒为模板，利用定点突变技术，将第186位点的天冬氨酸(asp)突变为天冬酰胺(asn)，突变子转化至e.colibl21(de3)并经iptg诱导表达，测定突变前后的酶活性，定点突变后的tsa无酶活性；采用dnastar和deepview蛋白分析软件，预测突变前后tsa蛋白的二级结构和三级结构，结果表明thermococcussiculihj21α-淀粉酶的186位点对维持tsa的酶活性具有重要意义，它的突变导致酶蛋白二级结构组件及氢键网络的改变。