凝乳酶的基因克隆、序列分析及初步表达

PCR扩增得到微小毛霉凝乳酶结构基因并测定其核苷酸序列,用DNAman软件分析其核苷酸序列及推衍得到的多肽序列,结果表明扩增得到的片段为凝乳酶基因。构建了重组菌Pichia pastoris KM71/PIC9K-mcp,通过G418抗性筛选得到具有多拷贝基因的整合重组菌MK3。用甲醇诱导进行初步发酵试验,测得重组菌MK3酶活为5.4U/ml