睾丸酮丛毛单胞菌工程菌构建及稳定性分析

？摘要本研究根据同源重组原理，利用电穿孔法将重组质粒pktac1-act1和pktac1-act2分别转化睾丸酮丛毛单胞菌(comamonastestosteroni)，经pcr和southernblot筛选获得2株睾丸酮丛毛单胞菌基因工程菌。对这两株基因工程菌的关键酶3α-羟基类固醇脱氢酶/碳酰基还原酶(3α-hydroxysteroiddehydrogenase/carbonylreductase,3α-hsd/cr)表达情况和细菌稳定性的分析结果表明：两株基因工程菌在没有诱导剂诱导的情况下，其3α-hsd/cr的表达量比原始菌提高了近20倍。添加抗生素进行培养，两株工程菌的activator和3α-hsd/cr表达均较稳定；而在不添加抗生素的培养基上培养时，两株工程菌的activator和3α-hsd/cr的表达变化较大，蛋白总体表达水平比添加抗生素时低。研究结果可以初步推断，3α-hsd/cr的表达受activator基因的表达调控。