松毛虫dna的提取及issr反应体系的建立

？为摸索适宜松毛虫的issr体系，以油松毛虫为实验材料，研究了issr技术中pcr反应体系的主要成分对issr扩增结果的影响。对issr反应体系中mg2+的浓度、引物浓度、dntp浓度、tagdna聚合酶浓度、模板浓度以及退火温度进行了探索，确立了适合松毛虫的issr反应体系为：在25μl反应体系、mg2+、引物和dntp的最适浓度分别为2.5mmol.l-1、0.8μmoll-1、0.20mmol.l-1；反应体系中tagdna聚合酶宜加入1.25ｕ，模板dna应加入15～30ng；引物的最佳退火温度为45.9～52.4℃。并利用该反应体系对14个地区的5种松毛虫进行issr反应，用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测，谱带多态性丰富，清晰稳定，证实该体系稳定可靠。