草鱼leptin基因的分离鉴定及在巴斯德毕赤酵母中的表达

？利用rt-pcr技术扩增出草鱼(ctenopharyngodonidellus)的leptin基因，将leptin基因克隆至真核表达载体ppic9k，电穿孔转化gs115菌株,经g418筛选和甲醇诱导后，对表达产物进行sds-page琼脂糖凝胶电泳和westernblot分析。结果表明，草鱼leptin基因cdna序列由438个核苷酸组成，编码146个氨基酸组成的多肽（genbank登陆号ay551335），与鲤鱼(cyprinuscarpio)leptin基因相比，核苷酸和氨基酸的同源性为99%；与人、猪和鼠相比，核苷酸同源性分别为84%、86%和95%,氯基酸的同源性分别为84%、82%和96%；与河豚(takifugurubripes)相比，氨基酸具有较大的差异，仅有9％的同源性，表明leptin在物种的进化上具有一定的差异；实现了草鱼leptin基因在毕赤酵母(pichiapastoris)中的表达，表达蛋白的分子量约为16kd，westernblot分析表明，表达产物具有一定的免疫学活性。