苏云金芽孢杆菌3’端缺失的vip3a基因在大肠杆菌中的表达

？将苏云金芽孢杆菌(bacillusthuringiensis)缺失c端154个氨基酸编码区的vip3a基因(vip3t)插入原核表达载体pqe30，构建了重组表达载体pqevip3t，并转化大肠杆菌(escherichiacoli)m15进行iptg诱导表达，比较了完整的vip3a蛋白和c端缺失的蛋白vip3t的可溶性和杀虫活性。与vip3a不同，融合蛋白vip3t以不可溶的包含体形式存在，诱导表达的菌液中没有检测到可溶性vip3t蛋白。生物测定结果表明，m15(potp)诱导表达的vip3a蛋白对初孵斜纹夜蛾(spodopteralitua)和甜菜夜蛾(s.exigua)幼虫具有较高的杀虫活性，其提纯的包含体无毒，但包含体的碱性裂解液却又恢复了对夜蛾科害虫的活性；m15(pqevip3t)菌液、包含体及其碱性裂解液对这两种昆虫幼虫则完全无毒，说明在大肠杆菌中，vip3a蛋白c端氨基酸可能对vip3a蛋白的可溶性和杀虫活性具有重要的影响。