嗜热子囊菌光孢变种cbh1基因的cdna克隆及在毕赤酵母的高效表达

？以嗜热子囊菌光孢变种(thermoascusaurantiacusvar.levisporus)总rna为模板，通过rt-pcr克隆出外切纤维二糖水解酶基因cbh1片段，采用race方法获得全长cdna克隆，其全长为1710bp，编码一种由457个氨基酸组成的单肽，推导的氨基酸序列中1～19位为信号肽序列，genbank的登录号为ay840982。将该片段克隆到毕赤酵母(pichiapastoris)分泌型表达载体ppic9k上，获得表达重组质粒ppic9k/cbh1，转化毕赤酵母gs115，所得重组子经pcr验证后进行诱导表达，筛选出一重组子gsp-15,经144h诱导后，外切纤维二糖水解酶表达量为1.17mg/ml，产酶活力为20.3u/ml。