环介导恒温扩增技术快速检测对虾白斑综合征病毒方法的建立

？dna环介导恒温扩增(loop-mediatedisothermalamplification，lamp)技术是一种特异、灵敏、快速的新型基因检测技术，其检测结果可以通过琼脂糖凝胶电泳观察，也可以通过加入核酸染料sybrgreenⅰ进行肉眼观察。本研究根据对虾白斑综合征病毒(whitespotsyndromevirus，wssv)的结构蛋白vp26基因序列，设计一套引物，成功建立了针对wssv的lamp检测方法。应用该方法，在65℃温育1h的条件下快速扩增病毒基因组dna，琼脂糖凝胶电泳得到特异性梯度条带；在反应体系中添加sybrgreenⅰ染料后，可通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。该研究建立的lamp法能特异性检出wssv，其检测下限比pcr法低一个数量级，相当于0.563pg/μl的质粒(pmd19-t-vp26)浓度。表明所建立的wssvlamp检测法特异性好、灵敏度高、操作简单方便，有望作为wssv快速诊断的常规方法。