环状芽孢杆菌乳糖酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质分析

？:将环状芽孢杆菌(bacilluscirculans)中的乳糖酶基因在大肠杆菌(escherichiacoli)中进行了高效表达,并测定了表达的乳糖酶的基本酶学性质。结果表明,表达的乳糖酶有生物学活性,但与来源于环状芽孢杆菌的原始酶相比,其酶促反应的最适ph、最适温度、km值,以及酶的ph稳定性和温度稳定性等酶学性质均有较大变化。表达的乳糖酶最适ph为5.0,低于原始酶的ph6.5;最适温度为37℃,而原始酶为55℃;其耐酸性、耐热性及对金属离子的抗性等方面比原酶有所提高;而且表达的乳糖酶km比原始酶小285倍、vmax比原始酶大5.4倍，表明经大肠杆菌表达的乳糖酶有较高的底物亲和力，酶促反应效率更高。从乳糖酶的单位表达量来看,原始酶在环状芽孢杆菌的表达量为20.98u/ml，而在大肠杆菌中的表达量提高到33.102？u/ml。