热硫化氢高温厌氧杆菌的ttx31基因克隆、表达与功能分析

？生物信息学分析发现，热硫化氢高温厌氧杆菌（thermoanaerobacterthermohydrosulfuricus）的?-淀粉酶/普鲁兰糖酶(?-amylase/pullulanase)基因中的一段未知功能序列ttx31可能编码碳水化合物结合结构域（carbohydratebindingmodule,cbm），但其结合特性未知。本实验以t.thermohydrosulfuricus为材料，通过菌落pcr扩增其ttx31序列，将获得的ttx31克隆到表达载体pet22b(+)中得到重组质粒pex31，序列分析表明，所得重组表达载体pex31中的ttx31序列正确。将重组载体pex31转入大肠杆菌宿主表达菌tuner中，iptg诱导表达后纯化，采用sds-page电泳和非变性亲和凝胶电泳法，研究重组表达的目的蛋白ttx31与糖的相互作用。结果发现，ttx31能结合糊精，但不能结合可溶性淀粉、普鲁兰糖、支链淀粉等。实验结果可以认为ttx31是一种功能性的新碳水化合物结合结构域，可以结合糊精。