α-半乳糖苷酶基因mel1在毕赤酵母中的组成型表达

？用pcr方法从酵母(saccharomyces？cerevisiae？)？ah109中扩增出α-半乳糖苷酶的mel1基因，将其克隆至整合型载体pgapzαa中构建成组成型分泌表达酶产物的重组质粒pgapzα-mel1。将线性化的重组质粒pgapzα-mel1电击转化至毕赤酵母(pichia？pastoris？)？km71，在含有100？mg/ml？zeocin和预先涂布有x-α-gal的ypds平板上选择蓝色阳性菌落。发酵培养酵母的上清经sds-page分析，在53？kd处有特异带；经非变性page凝胶电泳，与显色底物的反应，检测到α-半乳糖苷酶活性带。重组菌pgapzα-mel1？/km71摇瓶发酵6？d后，培养液α-半乳糖苷酶粗酶活性为12？u/ml。