豇豆胰蛋白酶抑制剂和硫氧还蛋白的融合表达和活性测定

？采用融合蛋白表达技术，通过1个人工设计合成的柔性接头，将豇豆胰蛋白酶抑制剂(cowpeatrypsininhibitor,cpti)基因与表达载体上的硫氧还蛋白(thioredoxin)基因连接，构建了融合表达载体。将表达载体转入大肠杆菌(escherichiacoli)gi724，通过色氨酸诱导获得高效表达，产物以可溶状态存在。活性测定显示，融合蛋白具有抑制胰蛋白酶的生物学活性。以大豆胰蛋白酶抑制剂为参照，将融合蛋白热处理后进行活性测定，发现它具有较好的热稳定性。将肠激酶(enterokinase)与融合蛋白在37℃作用16h，可获得切掉thioredoxin的cpti蛋白。活性测定显示，切除thioredoxin后cpti的胰蛋白酶抑制活性比同样处理条件下的thioredoxin-cpti明显下降，比活力仅为原来的80%，说明融合蛋白具有更高的稳定性。研究结果为thioredoxin-cpti作为一种生物农药的应用奠定了基础。