犬白细胞介素2在毕赤酵母中的诱导表达及生物活性的测定

？以cona刺激的犬外周血淋巴细胞总rna为模板，通过rt-pcr方法扩增出犬il-2成熟蛋白基因，将目的片段连接到pmd18-t载体，测序结果显示，扩增片段与genbank上发表的序列一致。然后将目的片段连接到酵母表达载体ppicza-a上，得到重组酵母犬il-2表达载体ppiczaa-cail-2，经sacⅰ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株x-33。pcr方法筛选重组酵母菌，甲醇诱导表达，sds-page结果显示表达上清中有大小约20kda的目的条带，比实际分子量略大，推测蛋白可能发生糖基化。mtt法测定生物学活性结果表明，重组犬il-2能够极显著促进犬外周血淋巴细胞增殖。证明酵母表达的犬重组il-2具有良好的生物学活性。