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农业生物技术学报 2012
兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白a(ompa)重组蛋白单克隆抗体的制备及潜在应用, PP. 616-626 Keywords: 多杀性巴氏杆菌,外膜蛋白a(ompa),重组蛋白,单克隆抗体 Abstract: ?制备兔多杀性巴氏杆菌(pasteurellamultocida,pm)外膜蛋白a(ompa)重组蛋白单抗,为兔多杀性巴氏杆菌病的诊断提供特异性强,灵敏度高的单克隆抗体。本研究选取并扩增pm外膜蛋白基因ompa,原核表达获得了的大小为37.6kd的ompa重组蛋白,以纯化复性的兔多杀性巴氏杆菌ompa重组蛋白作为免疫原,按常规方法免疫balb/c小鼠(musmusculus),取其脾细胞与sp2/0细胞融合,elisa筛选出了4株分泌pmompa蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为5d2、bc11、2a2和6a4。其中2a2细胞培养液效价为1∶256,5d2、bc11和6a4效价为1∶128;2a2腹水效价为1∶12800,其余3株达1∶6400。杂交瘤细胞经反复冻存、复苏及多次传代,仍能稳定分泌高效价抗体。westernblot显示,4株单克隆抗体均能与pmompa重组蛋白重组发生特异性反应。用elisa方法鉴定2a2单克隆抗体亚型为igg2b,proteina亲和纯化2a2腹水抗体,获得的单抗浓度为130μg/ml。选取纯化的2a2单克隆抗体进行潜在应用研究,westernblot与间接免疫荧光结果显示,单克隆抗体能与兔多杀性巴氏杆菌分离菌株发生特异性反应。表明利用体外重组表达兔多杀性巴氏杆菌ompa融合蛋白制成的杂交瘤能够稳定分泌效价高、特异性强的单克隆抗体,可用于兔多杀性巴氏杆菌诊断,本研究结果为兔多杀性巴氏杆菌诊断试剂盒的研制提供技术参数
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