%0 Journal Article
%T 兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白a(ompa)重组蛋白单克隆抗体的制备及潜在应用
%A 刘燕
%A 庞安娜
%A 韦强
%A 肖琛闻
%A 鲍国连
%A 季权安
%A 钱微
%J 农业生物技术学报
%P 616-626
%D 2012
%X ？制备兔多杀性巴氏杆菌(pasteurellamultocida,pm)外膜蛋白a(ompa)重组蛋白单抗，为兔多杀性巴氏杆菌病的诊断提供特异性强，灵敏度高的单克隆抗体。本研究选取并扩增pm外膜蛋白基因ompa，原核表达获得了的大小为37.6kd的ompa重组蛋白，以纯化复性的兔多杀性巴氏杆菌ompa重组蛋白作为免疫原，按常规方法免疫balb/c小鼠(musmusculus)，取其脾细胞与sp2/0细胞融合，elisa筛选出了4株分泌pmompa蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为5d2、bc11、2a2和6a4。其中2a2细胞培养液效价为1∶256，5d2、bc11和6a4效价为1∶128；2a2腹水效价为1∶12800，其余3株达1∶6400。杂交瘤细胞经反复冻存、复苏及多次传代，仍能稳定分泌高效价抗体。westernblot显示，4株单克隆抗体均能与pmompa重组蛋白重组发生特异性反应。用elisa方法鉴定2a2单克隆抗体亚型为igg2b，proteina亲和纯化2a2腹水抗体，获得的单抗浓度为130μg/ml。选取纯化的2a2单克隆抗体进行潜在应用研究，westernblot与间接免疫荧光结果显示，单克隆抗体能与兔多杀性巴氏杆菌分离菌株发生特异性反应。表明利用体外重组表达兔多杀性巴氏杆菌ompa融合蛋白制成的杂交瘤能够稳定分泌效价高、特异性强的单克隆抗体，可用于兔多杀性巴氏杆菌诊断，本研究结果为兔多杀性巴氏杆菌诊断试剂盒的研制提供技术参数
%K 多杀性巴氏杆菌
%K 外膜蛋白a(ompa)
%K 重组蛋白
%K 单克隆抗体
%U http://www.jabiotech.org.cn/CN/abstract/abstract8800.shtml