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ISSN: 2333-9721
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利用不同基因转移方法构建转基因红鲤

, PP. 1-11

Keywords: tol2,大黄鱼肌肉生长抑素前肽,转基因,生长

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Abstract:

?本实验研究了大黄鱼肌肉生长抑素前肽基因对红鲤的促生长作用。分别通过rt-pcr和pcr从大黄鱼(larimichtyscrocea)和pires-egfp质粒扩增得到了肌肉生长抑素(mstn)前肽基因及核糖体内部进入位点序列(ires)-增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)片段,经测序验证正确后,构建了tol2转座子供体质粒pt2al200r150g-mstnpropeptide-ires-egfp。通过精子介导法(s1、s2组)、电穿孔法(e1、e2组)及基因枪法构建转基因红鲤(cyprinuscarpio),孵化72h后的鱼苗经荧光显微镜检测,egfp表达阳性率为:精子介导法s1组38%,精子介导法s2组48%,电穿孔e1组47%,电穿孔e2组53%,基因枪组2%;孵化10d的仔鱼rt-pcr检测egfp和mstn前肽基因阳性率为:精子介导法s1组35%,精子介导法s2组45%,电穿孔e1组45%,电穿孔e2组55%,基因枪组1.8%。孵化后75d转基因红鲤与对照组相比,体长和体重分别提高了21.31%和27.59%。本实验结果表明,精子经高渗、低渗保存剂处理并通过电穿孔作用可大幅提高基因转移效率。

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