番茄不孕病毒bj株系基因组测定与侵染性克隆

？番茄不孕病毒(tomatoaspermyvirus,tav)可侵染包括藜科(chenopodiaceae)、茄科(solanaceae)等在内的24个双子叶家族和3个单子叶家族的100多种植物，是具有重要经济价值的植物病毒之一。为研究tavbj株系(tomatoaspermyvirus,tav-bj)的基因组功能，本实验对tav-bj基因组克隆测序，并构建侵染性克隆。以tav-bj侵染心叶烟(nicotianaglutinosa)的总rna为模板，rt-pcr获得其rna2和rna3；以tav-bj的dsrna为模板，rt-pcr获得全长rna1，目的片段pcr产物克隆测序获得tav-bj基因组全序列信息。rna1全长3409nt，编码994个氨基酸的1a蛋白；rna2全长3023nt，含2个开放阅读框(openreadingframe,orf)，2aorf编码829个氨基酸的2a蛋白，2borf编码78个氨基酸的2b蛋白；rna3全长为2216nt，包含2个orf，3aorf编码247个氨基酸的3a蛋白，外壳蛋白(coatprotein,cp)orf编码219个氨基酸的cp蛋白(tav-bj基因组rna1、2和3genbank登录号分别为hq424163，hq424164和hq424165)。tav-bj基因组cdna克隆体外转录成rna并接种于心叶烟上，结果表明转录产物在寄主上的症状反应和tav-bj病毒粒子rna的接种相一致，tav-bj基因组cdna侵染性克隆具有活性。由tav-bj各个基因片段与缺失2b基因的黄瓜花叶病毒fny株系(cucumbermosaicvirus,cmv-fnyδ2b)构建的假重组病毒接种于心叶烟，结果显示tav-bj的rna2和rna3能恢复cmv-fnyδ2b在寄主上症状反应。嵌合型rna3f3atcp和rna3t3afcp的症状反应结果表明，f1f2δ2brna3t3afcp在寄主上产生花叶症状与f1f2δ2bt3相一致。本研究获得tav-bj的基因组序列，成功构建侵染性克隆，同时发现tav-bj的3a基因具有cmv-fny的2b基因的某些功能。