细胞分裂周期蛋白2启动子报告基因载体的构建与鉴定

？目的：构建细胞分裂周期蛋白2cdc2基因启动子荧光素酶报告基因载体pgl3-cdc2-promoter，并检测其转录活性。方法：根据ucsc软件查找的人基因组dna的cdc2启动子序列并设计两端引物，扩增人基因组dna中的cdc2启动子。用限制性内切酶scaⅰ和xhoⅰ双酶切质粒pgl3-basic和cdc2启动子后，将cdc2基因启动子插入到pgl3-basic报告基因载体上。重组质粒命名为pgl3-cdc2-promoter。将其与内参质粒prl-sv40瞬时共转染骨肉瘤细胞u2os，检测双荧光素酶活性。结果：成功构建cdc2基因启动子荧光素酶报告基因载体pgl3-cdc2-promoter，质粒酶切及测序结果完全正确。瞬时转染实验显示，cdc2启动子具有转录活性，pgl3-cdc2-promoter的荧光素酶水平约是pgl3-basic的32倍。结论：pgl3-cdc2-promoter在骨髓瘤细胞u2os细胞中能被转录激活，为进一步将其用于抗肿瘤药物的筛选与评价奠定了基础。