人nanog-delta48基因的克隆及其真核表达载体的构建

？：目的：构建pcdna5/frt-nanog-delta48真核表达载体，检测其在肝癌细胞7721中的表达。方法：通过rt-pcr的方法克隆nanog基因的剪切变异体nanog-delta48全长编码序列，连接入pmd18-t载体，经鉴定正确后亚克隆入pcdna5/frt，构建pcdna5/frt-nanog-delta48真核表达载体，测序无误后经脂质体介导转染转染到肝癌细胞7721中，通过rt-pcr初步鉴定其在7721细胞中的表达，并通过四甲基偶氮唑盐（mtt）法检测转染前后的细胞增殖活力。结果：成功克隆nanog-delta48基因全长编码区，测序证明pcdna5/frt-nanog-delta48重组真核表达载体成功，使其在7721细胞中过表达，mtt检测nanog-delta48转染入7721细胞后，增值能力增强。结论：剪接变异体nanog-delta48基因可能具有与nanog基因类似的活性，将为进一步研究nanog-delta48基因的功能以及与nanog基因的关系及奠定基础。