人脐带血造血干细胞体外分化为nk细胞的效率及功能检测

？目的检测人脐带血造血干细胞（hscs）体外分化为自然杀伤（nk）细胞的效率及功能。方法从人脐带血中分离cd34+hscs，接种于含20μg/lfms样酪氨酸激酶3配体（flt3l）、干细胞生长因子（scf）、白细胞介素（il）-7、il-15及il-21的scgm培养基中，定向诱导cd34+hscs分化为nk细胞。观察细胞生长状态，在分化的第7、14、21及28天，采用流式细胞术检测各阶段cd56、nkg2d、nkp46、cd3、cd19及cd34等细胞免疫表型的表达变化；分化的第21、28天，以分化得到细胞为效应细胞，k562细胞作为靶细胞，设置8∶1、4∶1、2∶1和1∶14组效靶细胞比，分别采用乳酸脱氢酶（ldh）细胞毒性检测法和7aad/cfse标记法，检测分化得到的细胞杀伤功能。结果脐带血来源的cd34+hscs在体外适宜的条件下可大量增殖；整个分化进程的不同阶段中，cd3和cd19表达量差异无统计学意义，cd56、nkg2d及nkp46的表达量逐渐增加，最高达（72.57±1.60）%、（32.83±1.29）%和（29.53±2.40）%，cd34的表达量逐渐降低，最低为（12.13±2.01）%。ldh毒性检测法和7aad/cfse标记法测得最大杀伤效率可达（49.91±2.76）%和（40.87±1.12）%，8∶1、4∶1、2∶1和1∶1组nk细胞杀伤能力均依次降低（p<0.05），诱导分化28d的nk细胞杀伤能力与21d差异无统计学意义。结论人脐带血hscs在体外适宜的培养条件下，可定向分化为nk细胞，诱导分化得到的nk细胞具有杀伤功能。