猪传染性胃肠炎病毒m、sm基因重组杆状病毒的构建及病毒样颗粒的组装

？利用rt-pcr方法扩增猪传染性胃肠炎病毒（tgev）m和sm结构蛋白基因，将其分别克隆入载体pfastbactmdual，获得转移质粒pfastbactmdual-m和pfastbactmdual-m-sm，将重组质粒转化至dh10bac感受态细胞，经抗性与蓝白斑筛选，获得杆状病毒重组质粒bacmid-m和bacmid-m-sm，在cellfection作用下，将杆状病毒重组质粒转染昆虫细胞sf9，获得重组杆状病毒rbac-m和rbac-m-sm。通过westernblot、间接免疫荧光试验（ifa）进行检测，结果显示：重组蛋白在杆状病毒感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达。将重组杆状病毒rbac-m和rbac-m-sm分别感染sf9昆虫细胞，进行tgev病毒样颗粒（vlps）的体外组装试验。结果表明，m蛋白在sf9细胞内单独表达，m蛋白和sm在sf9细胞内共同表达，都可形成tgev病毒样颗粒，而且病毒粒子大小不等，直径在61～101nm。试验结果为进一步研究tgev结构蛋白在病毒装配过程中的作用提供了理论依据。