犬冠状病毒基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究

？以pvax1为载体首次构建了犬冠状病毒病基因的3种真核表达质粒。首先将犬冠状病毒大熊猫株（ccvdxmv）纤突蛋白（s）、膜蛋白（m）和核蛋白（n）基因进行了克隆和序列测定。将测序后的质粒pts、ptm和ptn分别双酶切，回收目的基因片段并将其定向克隆到真核表达质粒pvax1中得到重组质粒pvaxs、pvaxm和pvaxn。将这3种真核表达质粒通过脂质体介导法转染mdck细胞，通过rtpcr法进行转录水平的检测，并用间接elisa法检测目的蛋白的表达情况。结果在pvaxs、pvaxm、pvaxn转染mdck细胞36h后就可检测到目的基因的转录；在转染72h后可检测到3种目的蛋白的表达。动物免疫试验表明，3种真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫与体液免疫应答，这为ccv基因疫苗的研究奠定了良好的基础。