绵羊肌肉抑制素c端的表达、纯化及多克隆抗体的制备

？为深入了解绵羊myostatin基因的表达及调控机理，进行了绵羊myostatin蛋白多克隆抗体的制备。首先将绵羊myostatin基因c端克隆入含组氨酸标签的表达载体pet30ac(+)中，转化大肠杆菌bl21后iptg诱导表达，然后利用ni2+亲和层析纯化重组蛋白，薄层扫描及bradford法分别检测纯化后蛋白的纯度与含量。应用重组蛋白免疫家兔制备多克隆抗体，利用间接elisa法检测多克隆抗体效价，用westernblot及免疫细胞化学染色检测抗体特异性。结果，薄层扫描分析纯化后蛋白纯度可达95%以上，bradford法检测蛋白浓度约5mg·ml1，制备的抗血清效价可达1∶250000以上，westernblot检测证明抗体特异性良好，免疫细胞化学染色表明抗血清可检测到肌肉细胞中内源性myostatin的表达，说明所制备的多克隆抗体可以应用于进一步研究，有助于阐明绵羊myostatin的表达及调控机理。