快速鉴别奶牛乳腺炎细菌或真菌的双重pcr方法

？综合多种细菌、真菌dna模板的提取方法，采用β巯基乙醇裂解细胞壁，利用蜗牛酶和溶菌酶消化细胞壁，再利用石英砂机械破壁，能彻底破坏细菌、真菌细胞壁，提取高质量的dna，摸索出一套从奶样中同时提取细菌、真菌核酸的新方法。建立双重pcr方法,同时完成对细菌16srrna保守区特异性基因片段和真菌18srrna保守区特异性基因片段的扩增,快速诊断奶牛乳房炎是细菌感染还是真菌感染或是混合感染。对采自临床型乳腺炎和隐性乳腺炎病例的共计84个乳样分别用传统细菌学培养法和双重pcr方法对比鉴定。结果表明，双重pcr检测乳样细菌的最小浓度为102cfu/ml，检测乳样真菌的最小浓度为103cfu/ml。双重pcr方法对细菌的检测与平板培养检测方法比较差异不显著（p>0.05），对真菌的检测与平板培养检测方法比较具有更高的检出率（p<0.01）。