小反刍兽疫病毒核蛋白单克隆抗体的制备与初步应用

？针对小反刍兽疫病毒核蛋白制备特异性的单克隆抗体,并对其进行生物学特性鉴定和初步应用。以纯化的bacmidpprvn重组蛋白为抗原免疫balb/c小鼠，取免疫小鼠的致敏脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞在peg作用下融合，获得单克隆抗体，并通过染色体技术等方法研究其生物学特性，将其作为竞争单抗，bacmidpprvn重组蛋白作为检测抗原建立竞争elisa检测方法。结果表明：经克隆和间接elisa筛选，获得了2株能稳定分泌抗小反刍兽疫病毒n蛋白抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为5b11和3h103b8。生物学特性鉴定试验表明：5b11和3h103b8抗体类型和亚类均为igg2b；5b11单抗腹水的效价达1∶819200，3h103b8达1∶12800；血清学试验证明2株单抗均能与bacmidpprvn重组蛋白抗原结合，具有高度的特异性；相加elisa试验结果显示，5b11和3h103b82株单克隆抗体分别识别n蛋白上不同的抗原位点；2株杂交瘤细胞的染色体均为99～104。应用建立的celisa检测方法对222份血清样品进行pprv抗体的检测，与参考试剂盒比较得到98.20%的符合率。本研究获得了2株能稳定分泌抗pprvn蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，以单抗5b11作为竞争抗体建立了pprv的celisa检测方法。