猪源牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量pcr检测方法的建立

？本研究旨在建立一种荧光定量pcr检测方法，用于猪源牛病毒性腹泻病毒（bvdvs）检测，同时能鉴别诊断猪瘟病毒（csfv）。根据bvdvs与csfv5′-utr保守序列，设计一套引物和特异taqman探针，以本实验室构建的猪源bvdvs5′-utr阳性重组质粒为标准品，通过优化反应条件，建立了标准曲线。以构建的标准品为模板进行了特异性、敏感性、重复性试验、并应用于临床检测。结果显示，该方法检测csfv、猪繁殖与呼吸综合征病毒均为阴性；最低可检测到每个反应相当于10拷贝的标准品dna；重复性试验的批内变异系数为0.20%～0.95%；应用所建立方法对临床样品进行检测，其结果与普通rt-pcr结果的符合率为86.7%。本研究建立的实时荧光定量pcr具有特异、敏感、快速、重复性好等优点，可用于猪感染bvdvs、猪瘟疫苗污染bvdvs的监测。