牛源产ⅱ型不耐热肠毒素大肠杆菌的分离鉴定及重组毒素制备

？产ⅱ型不耐热肠毒素（lt-ⅱ）大肠杆菌是一类能引起严重腹泻的人畜共患肠道致病菌。为了解lt-ⅱ在牛源腹泻性大肠杆菌中的流行情况，本研究对2010—2012年间分离的138株大肠杆菌进行了lt-ⅱ毒素基因的检测，对分离到的10株lt-ⅱ阳性大肠杆菌进行了测序及分析。进一步将lt-ⅱc1毒素基因双顺反子的orf克隆入pet30a表达载体、转化rossatta感受态并诱导表达重组lt-ⅱc1毒素，经y-1小鼠肾上腺皮质细胞对重组毒素进行了初步的毒性验证。结果显示，所分离的10株lt-ⅱ阳性大肠杆菌中，有8株表达lt-ⅱc1毒素，1株表达lt-ⅱc4毒素，1株表达lt-ⅱc6毒素。sds-page和westernblot结果表明成功地制备出lt-ⅱc1重组毒素，该重组毒素可以使y-1小鼠肾上腺皮质细胞发生明显的病变，其细胞最小致死量为17.8pg。本研究为中国国内首次分离到牛源产lt-ⅱ型不耐热肠毒素大肠杆菌，为深入研究lt-ⅱ毒素奠定了基础。