山羊白细胞介素-4成熟蛋白基因的原核表达及其生物学活性检测

？本研究旨在进行山羊成熟白细胞介素-4的体外表达及重组蛋白生物学活性分析。运用pcr技术以pmd18-t-pgil-4（pgil-4为山羊il-4全序列基因）为模板扩增成熟蛋白（mil-4）基因，并构建pet-32a(+)-mgil-4原核表达载体，iptg诱导目的蛋白表达。使用改进的方法纯化目的蛋白后，采用淋巴细胞转化试验检测重组蛋白对山羊外周血t淋巴母细胞的增殖活性。经测序，mil-4含339个核苷酸，编码112个氨基酸。表达的重组蛋白约为31.3ku，主要以包涵体形式表达。通过改进纯化方法获得了高纯度的重组蛋白。试验证明，纯化、复性后的重组蛋白能显著刺激山羊外周血t淋巴母细胞的增殖，并表现出一定的剂量依赖性，8μg·ml-1增殖能力最强。本研究为山羊重组白细胞介素-4的规模化生产及作为佐剂的开发应用奠定了基础。