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牲畜兽医学报 2012
绵羊gfrα1基因的部分cdna克隆与抗原表位多肽的原核表达, PP. 1377-1384 Keywords: 绵羊,gfrα1基因,克隆,序列分析,原核表达 Abstract: ?旨在克隆绵羊gfrα1基因序列,深入研究绵羊精原干细胞(sscs)。本研究通过rtpcr扩增和分子克隆的方法克隆到了绵羊gfrα1基因的编码区大部分片段。结果,克隆得到的绵羊gfrα1基因的大部分cdna序列长1312bp,包括1311bp的开放阅读框(orf),编码437个氨基酸,与牛、人、黑猩猩、大鼠和小鼠相应核苷酸序列的同源性分别为98.5%、91.3%、91.0%、88.9%和88.0%。根据获得的cdna序列,预测已知片段的抗原表位区,并将抗原表位区序列插入pet-44a(+)载体,经转化得到重组菌,经iptg诱导表达,并通过亲和柱层析,纯化制备gfrα1抗原表位多肽。westernblot检测发现,经诱导表达的gfrα1抗原表位多肽约为18.2ku,与预测的大小一致。绵羊gfrα1基因的克隆和表达研究,为进一步制作该基因的多克隆抗体奠定基础,为绵羊sscs的分子水平鉴定及功能分析提供了研究条件。
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