猪戊型肝炎病毒ⅳ型衣壳蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

？为获得猪戊型肝炎病毒（hepatitisevirus,hev)ⅳ型衣壳蛋白单克隆抗体，将猪hev衣壳蛋白的c端267(408—675)个氨基酸基因序列克隆入原核表达载体pet-28a(+)，构建重组质粒pet-28a-orf2-c，转化e.colirosetta(bl21)感受态细胞进行诱导表达，sds-page和westernblot鉴定，纯化后免疫小鼠。取免疫小鼠的脾脏与鼠骨髓瘤细胞sp2/0融合制备单克隆抗体。通过间接elisa和竞争elisa方法筛选并鉴定单抗。结果表明蛋白得到正确、高效表达，获得3株识别不同的抗原表位区的单克隆抗体，分别命名为mab-1e4(igg1)、mab-2c7(igg1)和mab-2g9(igg2b)，其中1e4和2g9能阻断临床阳性猪血清，提示该2株单克隆抗体识别的抗原表位是猪hevⅳ型衣壳蛋白上重要的抗原表位区，而单抗mab-2c7不能阻断。本研究为猪hevⅳ型的诊断及研究提供重要工具。