猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株rt-pcr-rflp鉴别检测方法的建立

？本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株rt-pcr-rflp鉴别检测方法。根据shimen株设计1对特异性引物，建立猪瘟病毒rt-pcr-rflp检测方法；对20份疑似猪瘟临床样品进行检测，并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株pcr产物进行克隆与序列分析，验证上述方法。结果rt-pcr扩增片段为825bp，产物经rflp分析，野毒株的pcr产物能被apaⅰ酶切为322bp和503bp2个片段，兔化弱毒疫苗株则不能被酶切，检测出rna的最低浓度为0.0286μg·ml－1；8株流行野毒株都含gggccc序列（apaⅰ酶切位点），2株疫苗株相应序列为gagccc，不能被apaⅰ酶切；8株流行野毒株属于基因2群，2株疫苗株与hclv遗传关系近，为基因1群。建立了可鉴别猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株rt-pcr-rflp检测方法，为猪瘟的防控提供有效手段。