猪瘟病毒多表位基因的表达及其免疫原性分析

？体外表达猪瘟病毒（cfsv）t、b细胞表位，并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成cfsv的多个t、b细胞表位及表位之间的连接linker基因,并将该基因插入pgex6p1表达载体，经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆，成功构建了cfsv复合多表位抗原基因的原核表达质粒pgexbt500，转化e.colibl21，iptg诱导表达，纯化表达产物并免疫兔。结果：通过iptg诱导目的基因可高效表达，sdspage结果表明，以终浓度为0.9mmol·l-1的iptg进行诱导，7h后表达量最高，产物分泌表达，相对分子质量约43ku，表达产量约占菌体总蛋白的30%。westernblotting检测表明，表达的融合蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应；兔攻毒试验表明所免疫表达产物可保护（根据发热反应评价）兔。结果表明表达获得的产物具有良好的反应原性，这为应用该融合蛋白制备csfv免疫血清学诊断试剂和多表位疫苗研究奠定了基础。