鸭疫里默氏菌甲羟戊酸激酶基因的重组表达与免疫保护效果研究

？在从鸭疫里默氏菌（ra）基因组文库筛选毒力基因的过程中，作者获得了编码ra甲羟戊酸激酶的基因（ramva），将该基因片段提交genbank，收录号为gq398751。测序分析结果显示其开放阅读框长492bp，共编码163个氨基酸。根据序列信息设计引物，用pcr方法从ra中扩增出ramva的编码区并与表达质粒pmal-c2x连接，构建重组质粒pmalramva。经限制性酶切和序列测序鉴定序列正确无误后将pmal-ramva转化至e.colibl21(de3)构建重组表达菌e.colibl21/pmal-c2x-ramva。用iptg诱导重组菌成功诱导ramva的表达，通过sds-page分析表达产物，表达量占全菌总蛋白的15.6%，且重组表达的甲羟戊酸激酶在大肠杆菌中表达时以可溶性状态存在。雏鸭免疫试验表明，接种重组表达菌e.colibl21/pmal-c2x-ramva2周后，可产生对ra致死量攻击达42.3%的免疫保护率。