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ISSN: 2333-9721
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荷斯坦奶牛瘤胃微生物脲酶的分离与鉴定

, PP. 692-696

Keywords: 瘤胃脲酶,分离纯化,活性电泳,lc-ms/ms,蛋白质组

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Abstract:

?本研究旨在从荷斯坦奶牛瘤胃中分离活性脲酶。从奶牛瘤胃中收集瘤胃内容物,通过离心和超声破碎的方法得到不含菌体细胞的瘤胃液(cfrf)和瘤胃菌体蛋白液(rcp),利用85%硫酸铵盐析,并透析后,用hitrapcaptoq离子交换层析柱纯化脲酶。将纯化后的脲酶用活性page分离,并利用改良的fishbein染色法,确定脲酶条带位置,切胶,经胰蛋白酶消化后,用lc-ms/ms分析,并用sequest软件在ncbi数据库搜索与质谱信号相匹配的肽段和蛋白质。结果表明从cfrf和rcp中分离出较高活性的脲酶,但经染色后只有rcp脲酶显示活性条带。经质谱分析,最终鉴定出了3种微生物来源脲酶,分别与嗜热链球菌(streptococcusthermophilus)、唾液链球菌(streptococcussalivarius)和嗜碱芽孢杆菌(bacillushalodurans)相似。这说明绕过纯培养微生物,直接从瘤胃中分离脲酶,来研究其性质和来源是可行的,尤其适合对未培养微生物的研究。

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