表达o型口蹄疫病毒p12a3c基因的山羊痘病毒弱毒株的构建及筛选

？为构建和筛选表达o型口蹄疫病毒p12a3c基因的山羊痘病毒弱毒株，用已构建的口蹄疫病毒o/china99毒株的egfpp7.5p12a3c基因整体通过平末端连接到kpnⅰ酶切后的线性载体puc119tk中，得到重组载体puc119tkegfpp7.5p12a3c。重组载体通过缺失的tk基因与羊痘病毒弱毒株在bhk21细胞中同源重组，用egfp作为标记筛选出重组毒株，并进行pcr鉴定、抗原捕获elisa试验检测及westernblot分析。结果显示该重组弱毒株能在1~10代bhk21细胞中稳定传代,扩增出约3000bp片段，并经测序确证为基因p12a3c；抗原捕获elisa试验检测均为阳性；westernblot分析表明转移载体puc119tkegfpp7.5p12a3c在感染的gtpvav41bhk21细胞中表达的蛋白可被o型fmdv高免血清特异性识别，并具有反应原性。这些结果表明获得了表达o型口蹄疫病毒p12a3c基因的重组山羊痘弱毒株。